單克隆抗體的制備過程你會嗎

　　單克隆抗體是新一代抗體用于科研、診斷和治療，兔單抗技術通過用高質量兔單抗來替換多抗或低親合力鼠單抗產品，來改進難以復制的診斷產品。
 

　　單克隆抗體的出現帶來了許多好處。首先，兔抗血清通常含有高親合力抗體，可以比鼠抗血清識別更多種類的表位。其次，單克隆抗體能夠以識別許多在小鼠中不產生免疫的抗原。
 

　　單克隆抗體技術具體過程：
 

　　1、免疫脾細胞的制備
 

　　制備單克隆抗體的動物多采用純系Balb/c小鼠。免疫的方法取決于所用抗原的性質。免疫方法同一般血清的制備，也可采用脾內直接免疫法。
 

　　2、骨髓瘤細胞的培養與篩選
 

　　在融合前，骨髓瘤細胞應經過含8-AG的培養基篩選，防止細胞發生突變恢復HGPRT的活性(恢復HGPRT的活性的細胞不能在含8-AG的培養基中存活)。骨髓瘤細胞用10%小牛血清的培養液在細胞培養瓶中培養，融合前24h換液一次，使骨髓瘤細胞處于對數生。
 

　　3、細胞融合的關鍵:
 

　　1)、技術上的誤差常常導致融合的失敗。例如，供者淋巴細胞沒有查到免疫應答。這必然要失敗的。
 

　　2)、融合試驗最大的失敗原因是污染，融合成功的關鍵是提供一個干凈的環境，以及適宜的無菌操作技術。
 

　　4、陽性克隆的篩選應盡早進行
 

　　通常在融合后10天作第一次檢測，過早容易出現假陽性。檢測方法應靈敏、準確、而且簡便快速。具體應用的方法應根據抗原的性質，以及所需單克隆抗體的功能進行選擇。常用的方法有RIA法、ELISA法和免疫熒光法等。其中ELISA法，RIA法最準確。陽性克隆的篩選應進行多次，均陽性時才確定為陽性克隆進行擴增。
 

　　5、克隆化
 

　　克隆化的目的是為了獲得單一細胞系的群體?？寺』瘧M早進行并反復篩選。這是因為初期的雜交瘤細胞是不穩定的，有丟失染色體的傾向。反復克隆化后可獲得穩定的雜交瘤細胞株。