【白介素1受體拮抗劑洗滌方法】

1．自動洗板機：要求注入的洗滌液為350μl，注入與吸出間隔20－30秒。確保機器運用熟練后，再投入實驗中使用。

2．手工洗板：每孔加洗滌液350μl，靜置30秒后甩盡孔內液體，在吸水紙上拍干。手工洗板時，注意加入洗液的過程中，不要造成孔間污染，從而出現跳孔的現象。

【白介素1受體拮抗劑操作步驟】

• 從已平衡至室溫的密封袋中取出試驗所需板條，未用的板條和干燥劑請放回鋁箔袋內封存于2-8℃。
• 預留空白孔（若使用雙波長讀板，空白孔可以不設）。
• 分別將標本或不同濃度人RANKL標準品（0pg/ml孔加標準品稀釋液）加入相應孔中(100μl/孔)，用封板膠紙封住反應孔，37℃孵箱孵育90分鐘。
• 提前30分鐘制備生物素化人RANKL抗體工作液。
• 洗板3次。
• 加入生物素化人RANKL抗體工作液(100μl/孔)。用封板膠紙封住反應孔，37℃孵箱孵育60分鐘。
• 提前30分鐘制備酶結合物工作液。室溫避光放置。  
• 洗板3次。
• 除空白孔外，加入酶結合物工作液(100μl/孔)。用封板膠紙封住反應孔，37℃孵箱，避光孵育30分鐘。
• 洗板5次。
• 加入TMB顯色工作液（包括空白孔）100μl/孔，37℃孵箱，避光孵育，當標準曲線高濃度的顏色較深，有明顯的顏色梯度的時候，即可終止。試驗顯色反應請勿超過30分鐘。
• 加入終止液（包括空白孔）100μl/孔，混勻后即刻測量OD（450nm）值(10分鐘內)。  

【結果判斷】

1．每個標準品和標本的OD值應減去零孔的OD值。（若不減零孔值，標準曲線的零孔應相交于Y軸）

2．手工繪制標準曲線。以標準品濃度作橫坐標，OD值作縱坐標，以平滑線連接各標準品的坐標點。通過標本的OD值可在標準曲線上查出其濃度。使用專業制作曲線軟件進行分析，如curve expert 1.3進行結果計算。

3．若標本OD值高于標準曲線上限，應適當稀釋后重測，計算濃度時應乘以稀釋倍數。

注意：本圖僅供參考，應以同次試驗標準品所繪標準曲線來計算標本含量。

【操作程序總結】

準備試劑，樣品和標準品